孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、嚴(yán)基塊綠、孔雀綠，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍(lán)綠色。長(zhǎng)期以來(lái)，漁民都用它來(lái)預(yù)防魚(yú)的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲(chóng)病等，而且為了使鱗受損的魚(yú)延長(zhǎng)生命，在運(yùn)輸過(guò)程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠。

　　孔雀石綠試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

　　孔雀石綠試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被孔雀石綠抗原，樣品殘留的孔雀石綠和微孔條上預(yù)包被的抗原共同競(jìng)爭(zhēng)抗孔雀石綠抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中孔雀石綠的含量。

　　操作步驟：

　　1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

　　2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

　　3、洗滌工作液在使用前也需回溫。

　　4、編號(hào)：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。

　　5加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50μl/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中，然后加入抗試劑50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。

　　6、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。

　　7、加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復(fù)洗板步驟6。

　　8、顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。

　　9、測(cè)定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。（若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定）。